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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測試劑盒

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號：BC3310
規格：50T/48S
產品內容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 45 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑 35 mL×1 瓶，-20℃避光保存；臨用前加入 35mL 試劑一溶解。可溶解后分裝-20℃保存，避免反復凍融。
試劑三：液體 45µL×1 支，4℃避光保存；臨用前加入蒸餾水按體積比 1：120 稀釋，現用現配；
試劑四：液體 155µL×1 支，4℃避光保存；臨用前加入蒸餾水按體積比 7：250 稀釋，現用現配；
試劑五：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存；臨用前加入 2.5mL 蒸餾水充分溶解；可溶解后分裝-20℃保存，避免反復凍融。

產品說明：
PEPCK（EC 4.1.1.32）廣泛存在于動物、開花植物、藻類、部分真菌和細菌中。該酶催化草酰乙酸轉化為磷酸烯醇式丙酮酸,是調節糖異生途徑的第1限速酶。PEPCK 催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和 CO2，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH 氧化生成 NAD+，在 340nm 下測定 NADH 下降速率，即可反映 PEPCK 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、1mL 石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清，置冰上待測。

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

血清（漿）樣品：直接檢測。

二、測定步驟：
1、紫外分光光度計預熱 30min 以上，調節波長 340nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：將試劑二、試劑三、試劑四按 7:1:1（V:V:V）的比例配制工作液，工作液現用現配。
3、將工作液置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 5 分鐘。
4、操作表：在 1mL 石英比色皿中依次加入下列試劑：

相關文獻：

《Hepatic c-Jun regulates glucose metabolism via FGF21 and modulates body temperature through the neural signals》 作者:FeiXiao15YajieGuo15JialiDeng1FeixiangYuan1YuzhongXiao1LijianHui2YuLi1ZhiminHu1YuncaiZhou3KaiLi3XiaoHan3QichenFang4WeipingJia4YanChen1HaoYing1QiweiZhai1ShanghaiChen1FeifanGuo 期刊:Molecular Metabolism 影響因子:6.181 PMID:30579932

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