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谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測試劑盒

操作步驟：

一、 粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等體積：直接測定

二、 測定：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）保溫。

3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL試劑一，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。

4. 測定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL上清液，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A3和A4。

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測試劑盒

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下 (1) 按蛋白濃度計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr (2) 按樣本質(zhì)量計算 活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol/L CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W (3) 按細(xì)胞數(shù)量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每10 4個細(xì)胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細(xì)胞數(shù)量 (4) 按液體體積計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA 蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間（min），5min。 b. 使用96孔板測定的計算公式如下 1) 按蛋白濃度計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr 2) 按樣本質(zhì)量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W 3) 按細(xì)胞數(shù)量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細(xì)胞數(shù)量 4) 按液體體積計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA 蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間（min），5min。

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長為340nm；通過測定340nm波長處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined》 作者:Wensu Han，Yemeng Yang，Jinglin Gao，Dongxiang Zhao，Chengcai Ren，Shijie Wang，Shan ZhaoYihai Zhong 期刊:Ecotoxicology 影響因子:2.46 PMID:30874992
《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影響因子:3.794 PMID:29179148
《Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress》 作者:Le Guan , Muhammad Salman Haider , Nadeem Khan , Maazullah Nasim , Songtao Jiu , Muhammad Fiaz , Xudong Zhu , Kekun Zhang  and Jinggui Fang  期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30545146
《2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells》 作者:Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,Xiang Ji,Yanhua Lu 期刊:Food and Chemical Toxicology 影響因子:3.775 PMID:29626576
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii》 作者:Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,Laihao Li,Yueqi Wang 期刊:Environmental Pollution 影響因子:5.714 PMID:30036838
《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu  期刊:Scientific Reports 影響因子:4.011 PMID:29535326
 

北京索萊寶科技有限公司是一家從事生物學(xué)試劑及試劑盒的高科技生物企業(yè)。

總部位于北京，并在全國設(shè)有經(jīng)銷或代理機(jī)構(gòu)。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為完善的售后服務(wù)確立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念，擁有專業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量檢測團(tuán)隊以及的倉儲和物流系統(tǒng)。“Solarbio”已經(jīng)得到全國科研工作者的認(rèn)可，成為廣大經(jīng)銷商推崇的。

公司擁有一批專業(yè)的研發(fā)人員，我們專注于生物產(chǎn)品的不斷完善和創(chuàng)新。產(chǎn)品覆蓋面廣，品質(zhì)可靠。先后開發(fā)了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的多種試劑及試劑盒。同時，索萊寶公司提供各種常規(guī)生化試劑，庫存常備產(chǎn)品多達(dá)10000多種，可隨時為廣大科研工作者提供各類專業(yè)試劑。在質(zhì)量方面，索萊寶謹(jǐn)記公司信念：質(zhì)量高于一切。所有研發(fā)的產(chǎn)品都設(shè)有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳a(chǎn)流程，科學(xué)的質(zhì)量檢測方法和成熟的質(zhì)量檢測程序，我們恪守對每一位用戶的承諾：用專業(yè)的態(tài)度做專業(yè)的品牌。同時，公司組建了一支專業(yè)的技術(shù)服務(wù)隊伍，能夠為科研工作者提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)。每一位購買索萊寶產(chǎn)品的用戶都能夠得到專業(yè)的咨詢和完善的售后服務(wù)。

索萊寶公司堅持與接軌，注重和企業(yè)的合作與交流，并提供產(chǎn)品代理、市場咨詢等多項服務(wù)。公司將一如既往與世界更多合作，不斷為廣大生物科研工作者提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)。公司理念：“為科研服務(wù)，為生命盡責(zé)”。一個人能夠走多遠(yuǎn)，取決于與誰同行。索萊寶公司期待與各同行精誠合作。 

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