硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒

產品英文名:  Nitrate Reductase（NR）Assay Kit

產品貨號：BC0080       產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/24樣          產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：300
庫存狀態：現貨                          
關鍵字:  硝酸還原酶檢測試劑盒|NR檢測試劑盒|硝酸還原酶|試劑盒

簡要介紹：
NR廣泛存在于植物中，是植物硝態氮轉化為氨態氮的關鍵酶，也是誘導酶，對作物的產量和品質有影響。
    NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O ；產生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對氨基ben磺酸及α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰，可用分光光度法測定。

產品詳細描述
產品內容：
誘導劑儲備液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體40mL×1瓶，-20℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，-20℃保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存。
標準液：NaNO₂標準儲備液1mL，10μmol/mL，-20℃保存。
誘導劑應用液的配制：用時將誘導劑儲備液稀釋10倍，即取10mL誘導劑儲備液加90mL蒸餾水，充分混勻。
標準液的配制：將標準儲備液用蒸餾水稀釋為1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 濃度的標準溶液 。
產品說明：
NR（ EC 1.7.1.3）廣泛存在于植物中，是植物硝態氮轉化為氨態氮的關鍵酶，也是誘導酶，對作物的產量和品質有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO₃ˉ+NADH+H^＋→ NO₂ˉ +NAD^＋+H₂O；產生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對–氨基ben磺酸α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰，可用分光光度法測定。
需自備的儀器和用品:
     可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測定的前處理
1、取適量誘導劑于燒杯中，將新鮮標本洗凈，濾紙吸干，放入誘導劑應用液中（淹沒即可），浸泡2h，取出樣本，濾紙吸干后，-20℃冷凍30min，取出樣本，濾紙吸干。（根據需要進行誘導處理）
2、稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液，冰浴研磨，4000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
二、測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長540nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
 

混勻后，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴30min

    混勻，顯色20min，4000g 常溫離心10min，取上清，540nm下比色，計算A測定-A對照。
    注意：空白管只需測一次。
三、NR活性計算：
1. 標準曲線的繪制：
以標準溶液濃度為x軸，以ΔA（A標準管-A空白管）為y軸繪制標準曲線，得到線性回歸方程y=kx+b。將（A測定-A對照）帶入方程中，計算出x（μmol/mL）。
2. NR活性的計算：
（1）按樣本鮮重計算：
單位定義：每小時每g鮮重樣品中催化產生 1μmol NO₂ˉ的量為一個 NR活力單位。
NR（U/g 鮮重）=x×V樣品÷(W÷V樣總×V樣品)÷T= 2x÷W。
（2）按樣本蛋白濃度計算：
單位定義：每小時每mg組織蛋白催化產生 1μmol NO₂ˉ的量為一個 NR活力單位。
NR（U/mg prot）=x×V樣品÷（V樣品×Cpr）÷T=2x÷Cpr。
V樣品：吸取樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

相關文獻：
《FIP1 Plays an Important Role in Nitrate Signaling and Regulates CIPK8 and CIPK23 Expression in Arabidopsis》 作者:Chao Wang, Wenjing Zhang, Zehui Li, Zhen Li, Yingjun Bi, Nigel M. Crawford and Yong Wang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.716 PMID:
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
《The trehalose-6-phosphate synthase TPS5 negatively regulates ABA signaling in Arabidopsis thaliana》 作者:Lianfu Tian,Zijing Xie,Changqing Lu,Xiaohua Hao,Sha Wu,Yuan Huang,Dongping Li,Liangbi Chen 期刊:Plant Cell Rep. 影響因子:3.499 PMID:30963238
 

硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒