名稱：支原體檢測(cè)試劑盒 貨號(hào)：CA1080
保存：4℃保存，有效期為2年，Hoechst工作液需要避光保存。
產(chǎn)品內(nèi)容：
Hoechst 33258工作液
50ml
固定液
50ml
抗熒光衰減封片液
10ml
說(shuō)明書
1份
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域，因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA染色斑，說(shuō)明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。
操作步驟：
貼壁細(xì)胞：
1、被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時(shí)，接種正常無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。
2、5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
懸浮細(xì)胞：
1、收集需檢測(cè)的細(xì)胞，1500rpm，5min。
2、將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液，用無(wú)菌水洗滌玻片3次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。 |
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