硝酸纖維素膜是蛋白印跡廣泛使用的轉移介質,其優(yōu)點是對蛋白有結合能力強,適用于各種顯色方法,包括同位素,化學發(fā)光(Luminol類)、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色;背景低,信噪比高;使用也很簡便,不需要甲醛預處理,只須在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡,再在電泳緩沖液中平衡;而且容易封閉,也不需要特別嚴謹?shù)那逑礂l件。轉移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間,但是純的硝纖膜在比較脆,容易卷,不適合用于需要多次重復清洗的用途。選擇硝纖膜時要注意的是選擇合適的孔徑,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜,小于20KD的話建議選擇0.2um的,如果小于7KD的話好選擇0.1um的膜。另外由于NC膜上結合的蛋白會因為一些去污劑而被代替,因此在封閉時好使用較溫和的Tween20,而且濃度不要超過0.3%(據(jù)說0.05%效果好)。 |